独特的腺相关病毒载体生产方法
威洛克生物技术公司经过多年的研究, 成功发明出应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞内来组装并生产腺相关病毒。昆虫细胞的悬浮培养比较哺乳类细胞的单层培养简单易行,它不受培养面积的限制,从二维平面上升到三度空间。另一优点是昆虫细胞的悬浮培养不需要哺乳类的血清,减少培养过程中的多个步骤,降低细胞感染率, 从经济效益上更是一大进步。
Virovek has developed a proprietary BAC-to-AAV technology that utilizes the baculovirus expression system to produce AAV vectors in insect cells under serum-free condition. Our AAV vectors have been proven to infect and transduce a myriad of mammalian cell lines in vitro and a broad range of cell types in vivo.
Our AAV technology is recognized as the world’s most powerful and efficient AAV production platform. We have the capability to generate over 1E+16vg of AAV vectors with a single production run, which is unmatched by any other AAV production system.
Since 2006, we have established a growing list of partnerships in both academia and industry.
为你合成腺相关病毒的三步骤:
1) 完善克隆基因
我们设计出最好的基因克隆方案, 将您所要表达的基因克隆在威洛克特定的质粒中,克隆过程包括DNA序列合成等各项技术。质粒被DNA测序证实完全正确后,才进行下一部步骤。
2) 杆状病毒合成
我们将携带您所要表达的基因转染后成为杆状病毒质粒, 再以杆状病毒质粒转染方式在昆虫细胞内包装合成病毒。杆状病毒经过三次扩增和提纯,以确保每一步骤的正确。
3) 重组腺相关病毒
最后, 携带您所需基因的杆状病毒与携带腺相关病毒壳蛋白基因的另一种杆状病毒,同时感染SF9昆虫细胞,产生出高活性、高感染率, 能携带您的功能性基因到达靶细胞的重组腺相关病毒。 SF9细胞被裂解,释放出腺相关病毒, 经过复杂的酶解和超速离心,病毒被浓缩提纯,QPCR滴度测定和无菌处理后,完成产品包装。
腺相关病毒生产时间表
腺相关病毒生产全程需要 5-6 周时间来完成 (参照时间表如下).
步骤 | 描述 | 估计所需时间 |
---|---|---|
1 | 您指定基因克隆在威洛克特定的质粒中 | 1~2 weeks |
2 | 杆状病毒质粒生成 | 1 week |
3 | 杆状病毒质粒转染SF9昆虫细胞 | 1 week |
4 | 杆状病毒扩增提纯 | 1 week |
5 | 腺相关病毒生产和提纯 | 1 week |
6 | 腺相关病毒脱盐、无菌消毒和滴度测定 | 2 days |
非专用性专利共享合作
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